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原代细胞传代培养

时间:2018-07-05 15:49 点击:2335次

细胞培养过程中,传代是非常重要的环节,若操作不当会给细胞带来不可逆转的伤害,原代细胞因其培养难度高且传代次数有限,细胞消化的步骤需要格外细心与谨慎。美国ScienCell公司根据其丰富的原代细胞培养经验,总结出一套细胞消化的方法,有效降低了消化步骤对细胞的操作。现分享给大家:

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1. 当细胞达到80-90%融合时需要传代培养。

2. 提前准备好多聚赖氨酸(PLL,货号0403纤维粘连蛋白(BPF,货号8248包被好的培养瓶。

3. 将完全培养基,胰酶/EDTA消化液(T/E,货号0103胰胰中和液(TNS,货号0113不含钙镁离子的DPBS(货号0303加热至室温。我们不推荐用37度水浴加热试剂和培养基。

4. DPBS冲洗细胞。

5. T-75培养瓶为例,向培养瓶中加入8mlDPBS,然后加入2ml胰酶/EDTA消化液。轻轻摇动培养瓶保证细胞被胰酶/EDTA消化液完全覆盖。将培养瓶置于37度培养箱1-2分钟直到细胞变圆。在显微镜下观察细胞形态变化。

6. 在消化期间,准备一支50ml离心管加入5ml胎牛血清(FBS,货号0500

7. 将胰酶/EDTA消化液从培养瓶中吸出至50ml离心管中(一小部分细胞已消化下来),将培养瓶继续置于37度培养箱中1-2分钟(此时培养瓶中没有液体)。

8. 在孵化结束时,轻轻拍打培养瓶侧面使细胞脱离表面。在显微镜下检查以确保所有细胞已脱离。

9. 向培养瓶中加入5ml胰酶中和液,将消化后的细胞转移至50ml离心管中。再加入5ml胰酶中和液冲洗培养瓶,以保证所有细胞被收集。

10. 在显微镜下观察剩余细胞数量以确定是否收集成功,细胞数量应小于5%

11. 1000/分离心收取的细胞悬液5分钟,然后在培养基中重悬细胞。

12. 细胞计数,然后将细胞以推荐的细胞密度接种在包被好的培养瓶中。

如果您在细胞培养过程有有任何疑问,欢迎致电美国ScienCell中国区总代理-北京裕恒丰公司,公司竭诚为您服务。


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